Metode de diagnosticare si tipuri de analize in Borrelia Centrum

Tehnica si aparatura

În principal există două tipuri de analize: directe și indirecte.

 Metodele de testare sunt imunofluorescenta indirect, determinarile pe ELISA si multiple tehnici blot (Westernblot, EUROASSAY, EUROLINE, EUROLINE-WB). Marea majoritate a testelor Euroimmun sunt automatizate. Prin metodele de productie inovatoare si patentate, prin tehnicile de microanaliza, Euroimmun este unul din lideri mondiali al produselor medicale de diagnostic in laborator.

 Biocipurile Euroimmun sunt descoperirea Euroimmun : testele sunt acoperite cu sectiuni celulare sau de tesut apoi sunt taiate automatic in fragmente de mm care sunt lipite secvential pe lama folosind aparatura automatizata. Tehnologia BIOCIP permite miniaturizarea extrema si standardizata a analizelor imunobiochimice. Cu BIOPCIP Mosaic (format din 30 sau mai multe sectiuni de organe diferite, substrat celular sau anitgene) efortul este minim pentru a obtine detaliile unui profil de anticorpi.

 In sistemul IMUNOASSAY enzimatic Euroimmun foloseste un process biotehnologic de inalta arta pentru definirea substratului de antigen. O parte din aceste antigene sunt sintetizae in laboratoarele Euroimmun. Toate testele sunt livrate gata de citit. Euroimmun ofera unul din cele mai mare arsenale de enzyme IMUNOASSAY din lume pentru diagnosticul bolilor autoimune si infectioase.

 Procedurile inovative EUROASSAY si EUROLINE dezvoltate de Euroimmun urmaresc aceleasi principii de testare de la metoda ELISA folosind tehnologia BIOCIP. La EUROIMMUN antigenele purificare sunt imprimate in linii paralele si pozitii definte pe membrane strip-urilor. Dupa incubare rezultatul este evaluat vizual fara echipamente aditionale. Acesti reactivi permit diferentierea particulara a anticorpilor ce nu pot fi definiti clar de microscop In metoda imunofluorescentei . EUROASAY si EUROLINE au angajati in laboratoare in care instrumentele sofisticate nu pot fi folosite. Prin procesele de electroforeza sofisticate s-a permis separarea unor proteine specifice ce creste garantia diagnosticului. Programul EUROLineScan   este capabil sa faca o evaluare totala automata a membranelor din testele de baza simplificand citirea testelor si permite arhivarea rezultatelor.

 Una din marile calitati ale companiei este expertiza tehnica. Ea nu doar fabrica si vinde teste de laborator, dar diagnosticul aplicat pe produse este unul de inalt grad de diferentiere. Spectrul de diagnostic al laboratorului acopera aria infectiilor serologice, alergiilor si bolilor autoimmune. Euroimmun isi ajuta clienti prin securitatea rezultatului si prin pregatirea personalului in cadrul companiei.

 

IMUNOFLUORESCENTA

 Principiile testului

 -Pentru determinarea autoanticorpilor impotriva agentilor infectiosi, celulelor, tesuturilor sau purificate, substantele biochimice sunt folosite ca substraturi de antigen.

 -Daca rezultatul este pozitiv,anticorpii specifici din proba de ser diluata se lipesc de antigene cuplate la o stare solida.

 -In al doilea pas anticorpii atasati sunt colorati cu anticorpi antiumani marcati cu fluoresceina si vizualizati cu un microscop fluorescent.

 -Mostrele positive pot fi titrate in pasi. Cel mai potrivit interval titrat este dat de factorul de dilutie 3.162 (radical din 10). In acest mod fiecare al doilea pas care reprezinta puterea integral de 10 (1:10, 1:32, 1:100, 1 : 320, 1 : 1000, 1 : 3200, 1 : 10000 etc.).

  • Specificatate ridicata: mostrele positive si negative produc o mare diferenta in puterea semnalului. Fiecare anticorp legat arata un model tipic de fluoresceina depinzand de locatia fiecarui antigen.
  • Intreg spectrul de antigene al substratului orgininal este disponibil astfel incat permite detectarea unui numar mare de anticorpi si rezultand o rata de detectare mai mare.
  • Imunofluorescenta permite detectarea simultana a anticorpilor impotriva mai multor antigene diferite biochimic intr un singur substrat biologic.
  • Testul indirect de imunofluorescenta este metoda analitica potrivita cand ar fi prea dificil sau prea complicat de preparat teste individuale antigenice pentru enzime imunologice.

Determinarea anticorpilor cu aviditate scazuta ( teste de Aviditate)

O alternative principala a diagnosticului serologic al infectiilor recente a fost stabilit prin investigarea aviditatii anticorpilor

Prima reactive a sistemului imunitar urmatoare infectiei este formarea de anticorpi cu aviditate scazuta. O data cu avansarea infectiei, o cantitate mare de antigen adaptate IgG este formata si aviditatea creste. Atat timp cat IgG cu aviditate crescuta nu este inca detectata in ser se poate considera ca infectia este inca intr-un stadiu incipient.


Pentru a identifica anticorpi cu aviditate scazuta in serul unui pacient doua teste imunofluorescente sunt realizate in paralel: un test este realizat intr un mod conventional iar cel de al doilea include tratamentul ureic intre incubarea cu serul pacinetului si peroxidaza marcata cu IgG antiuman, rezultand detasarea anticorpilor cu aviditate scazuta de antigene.

 Anticorpii cu aviditate scazuta sunt prezenti daca intensitatea de fluoresceina este redusa in mod semnificativ (doua sau mai multe nivele de intensitate) de tratament ureic.

 Sunt disponibile urmatoarele chituri de testare pentru determinarea aviditatii: Toxoplasma gondii, Virusul rubeolic, Virusul West-Nile, EBV-CA, EBV-EA, VZV, CMV.

 

 

 

WESTERNBLOT

 

Principii ale Testului

 

 Benzile de membrana ce contin extracte de antigen separate prin electropforeza sunt utilizate drept faze solide.

  • Pozitia proteinelor depinde de propriile lor mase molecular.
  •  Daca mostra e pozitiva anticorpii specifici in mostra de ser diluata se atasaza antigenelor cuplate cu membrane.
  •  Intr-un al doilea stadiu de incubare anticorpii atasati reactioneaza cu AP-marcate anticorpilor antiumani.
  •   Pasul trei, anticorpii legati sunt incarcati cu o solutie cromogena/ de substrat care este capabila sa promoveze o reactive colorata. O banda inchisa intensa la linia ce corespunzatoare antigenului apare daca mostra de ser contine anticorpi specifici.
  •  Evaluand modelul benzii de pe benzile membranei incubate, implica diferentierea anticorpilor nespecifici de cei specifici. Numarul si intensitatea benzilor specifice este deciziva pentru rezultatul “pozitiv/negative”

 

 

EUROLINE-WB: detection of antibodies against Borrelia

  •  O fasie de membrana separata este incubata pentru fiecare mostra de ser.
  • Timpul total pentru efectuarea testului Westernblot este de aproximativ 115 minute.
  • Toate etapele de incubare se desfășoara la temperatura camerei.
  • • Benzile sunt alocate în funcție de o matrice de evaluare-lot specific furnizat. Un lot separat este emis pentru fiecare gel electroforeza, ajutând la evitarea aparitiei  erorilor în atribuirea benzilor
  • Fiecare kit de testare conține o bandă de membrană din același lot incubate cu un ser de referință pozitiv. Prin urmare, nu este necesar să se incubeaze un ser de control pozitiv.
  • Benzile de membrane sunt pre-numerotate pentru a evita confuzia. Etichetarea laborioasa nu este necesara.
  • Completarea corectă a etapelor individuale de incubare pentru fiecare bandă de membrană este indicată prin colorarea benzii de control de la baza benzii.
  • Reacții pozitive și negative pot fi ușor și sigur diferențiate unele de altele.Intensitatea benzilor de antigen este corelata cu titrul de anticorpi.
  • Westernblot este metoda de alegere atunci când obiectivul este de a confirma sau a diferenția rezultatele pozitive obținute într-un test de screening (imunofluorescență indirectă sau microplăci ELISA).
  • EUROLINE-WB este o combinație de westernblot și linie tehnici Blot. Proteinele de la un extract de antigen sunt separate electroforetic în funcție de masa moleculară și transferate pe o membrană de nitroceluloză. Antigenele native sau recombinante pure sunt apoi imprimate ca linii de pe benzile westernblot (EUROLINE cip membrana).
  • Programul EUROLineScan de EUROIMMUN a fost dezvoltat pentru a permite evaluarea cantitativă a benzilor de testare Westernblot / EUROLINE-WB, pentru a facilita gestionarea datelor, precum și pentru a oferi o documentare  detaliată a rezultatelor. In primul rand benzile de testare incubate Westernblot / EUROLINE-WB sunt scanate cu ajutorul unui scanner. EUROLineScan recunoaște poziția a benzilor, chiar dacă acestea au fost plasate inexact, identifică benzile și măsoară intensitatea lor. Rezultatele sunt apoi salvate împreună cu imaginile. O foaie separate de rezultate poate fi produsa pentru fiecare pacient.

 

ELISA

Principii ale Testului

 

 

  • Dacă proba este pozitivă, anticorpii specifici din proba de ser diluat sunt atașați la antigenele cuplate la faza solidă
  •  În a doua etapă, anticorpii legați sunt detectati cu anticorpi anti-umani marcați cu peroxidază.
  •  In a treia etapă, anticorpii legați sunt făcuti vizibili folosind o soluție de cromogen / substrat care este capabil de a stimula o reacție de culoare. Intensitatea culorii produsă este proporțională cu concentrația de anticorpi în proba de ser.
  •  Monospecific ELISA (imunoteste enzimatice cu un singur antigen )oferă o analiză cantitativă in vitro pentru detectarea anticorpilor. "Profil ELISA" oferă o analiză semicantitativă in-vitro pentru detectarea anticorpilor diferiti pe o singură bandă de microplăci.
  •  Faza solidă a "Pool ELISA" este acoperita cu un amestec de antigen pentru detectarea semicantitativa a anticorpilor a căror specificitate trebuie investigata ulterior prin teste monospecifice.

 ........